在疫情防控中,核酸检测发挥了重要作用。据了解,无锡市目前有10家医疗机构向社会提供新冠病毒核酸检测服务,如江南大学附属医院、中医医院、五院、二院等。昨天,市疾控中心负责人介绍,全市累计开展新冠病毒核酸采样检测36.58万人份。核酸检测应在什么样的环境下进行呢?又是如何防止病毒外泄?检测结果如何得出?如何确保检测结果准确?带着这些疑问,日前记者走进无锡二院PCR实验室(临床基因扩增实验室)一探究竟。
PCR实验室要求严格,人员三级防护
二院检验科主任黄学文介绍,核酸检测整个操作过程需要在严格的实验环境中,才能保证数据结果的准确性。因此,必须是具备生物安全二级及以上实验室资质、具有临床基因扩增实验室条件的,才可以进行。二院的PCR实验室4月初启动至今,已完成4000多份核酸样本检测。
他介绍,PCR实验室利用分子生物学技术,通过放大核酸片段,利用基因追踪系统,掌握人体内部的病毒含量。建立一个PCR实验室的条件较为严格,其设计的核心问题是如何避免污染,这对平面布局、空调通风、系统设计、气流控制等都有很高的要求。
一个标准的PCR实验室分为四个区域,分别为:试剂准备区、样本处理区、产物扩增区、产物分析区。进入各区域,必须严格按照单一方向,也就是说,只能从这个口进,那个口出,不能走回头路,以防内部污染。每个独立实验区都设置有缓冲区,整个区域有一个整体缓冲走廊。同时,实验室最好保持负压状态,确保区域内污染物不向外扩散。检测人员必须经过生物安全培训,有分子生物学基础,并且持有PCR上岗证,上岗时要三级防护。
转运灭活提取制备,样本要经过层层关口
核酸检测从取样到出结果,要经过多少道工序呢?黄学文介绍,首先是通过鼻咽拭子获得采样标本,别小看这一步,能否采集成功是检测的基础。然后将拭子浸入含细胞保存液的保存管中,立即旋紧管盖,将保存管放入密封袋中,再用符合生物安全条件的专用运输箱及时送检。转运箱共有3层密封,每转运一次就要消毒。转运过程中需要维持4-8℃严格的运输环境。
下一步是进入实验室检测,检测前,需要把样本放在56℃的水箱中进行30分钟的灭活。病毒灭活是非常重要的一步,作用是使细胞不再有生理活性,病原微生物失去感染、致病和繁殖能力,保证操作人员的安全,防止活的病原微生物泄漏污染环境。灭活的同时还要保证不影响样本基因组的完整、不影响检测结果。
在半小时的灭活后,要对核酸样本进行提取。吸取一定量的标本,用专业仪器完成病毒核酸的提取,然后进行制备。制备就是用荧光定量PCR扩增仪将病毒的核酸片段进行几百万倍的复制,使其可被仪器检测,并判断病毒是否存在。整个检测过程需要4个小时左右。
在整个过程中,为了保证无活病毒泄漏,除了用专用运输箱运输和灭活处理以外,样本处理也需在生物安全柜中进行,从而保证实验室周围环境的安全。
连续工作10小时,检验员“全副武装”不吃不喝
随着发热病人、住院病人和陪护家属等都要求核酸检测,二院又增加了一台检测的仪器,现在每天可以完成360-400份的检测。整个操作中,他们直面新冠病毒,因此上岗时采用三级防护,穿防护衣、护目镜、隔离衣,并戴上N95口罩、双层手套,套上脚套等。检测人员每天从早上十点进入实验室,到晚上八九点才能出来,每次都要工作十个小时以上。在此期间,检验员既不能吃喝,也不能上厕所,承受着巨大的心理压力和生理压力。
新冠肺炎的确诊最核心的依据就是核酸检测的结果,为保障患者就医和对社会公众开展核酸检测需求,国家要求各地要加强PCR实验室建设,6月底前,所有三级综合医院全部建立检测实验室。8月底前,二级以上医院全部建立检测实验室,做到重点人群“应检尽检”、重点行业“适时抽检”、一般人群“愿检尽检”。
据介绍,PCR实验室除了能检测新冠病毒外,还能检测其他病原微生物或其他感染性疾病,如艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等。